Preconizó la división de la octava en doce intervalos y, aunque Pietro Aaron haya sido probablemente quién describió una forma de temperamento mesotónico, es Zarlino quién parece haber sido el primero en hacerlo de manera precisa, explicando en detalle el temperamento a los 2/7 coma en su obra de 1558, Istitutioni harmoniche. En otra obra de 1571, titulada Dimonstrationi harmoniche, examinó los diferentes modos y recomendó el de Do Mayor (modo jónico). Se acerca así al sistema armónico y melódico fundamentado en la tonalidad, que priorizaría los modos mayor y menor en detrimento de los modos antiguos.

Gioseffo Zarlino intenta, probablemente por primera vez, en sus tres famosos tratados-- Instituciones armónicas(1558), Demostraciones armónicas(1571), y Suplementos musicales(1588)--,llevar a cabo una racionalización sistemática dentro del campo de la música. Sin embargo, no se propone revolucionar la teoría musical, sino, tan solo, ofrecer a esta unos fundamentos nuevos y más sólidos. Sin renunciar al concepto de música mundana, su modo de interpretar este antiguo mito es, sin embargo, peculiar :”la mundana es aquella armonía que no sólo se sabe que existe entre los objetos que se ven en el cielo, sino que incluso se contiene en las relaciones de los Elementos [ entre sí ] y en la variedad de los tiempos.Zarlino se sirve del concepto metafísico que la tradición había elaborado al objeto de separar rígidamente teoría y praxis musicales; se trata, al fin y al cabo, de un retorno al primigenio pitagorismo según el cual la música celeste no seria otra cosa que una serie de relaciones numéricas que se establece como fundamento de la armonía.
La apelación de Zarlino a la música mundana viene a ser una relación de tipo arbitrario o convencional, sino una relación que se apoya en la naturaleza de las cosas y que, por consiguiente, es racional; esta clase de relación se descubre tanto en las analogías que se originan entre los sonidos como las que se originan entre los ”elementos”, es decir, en los demás fenómenos naturales. Zarlino no pretendía en ningún caso separarse de la practica contrapuntista; su sistematización sui generis, no se fundaba en unos principios racionales, sino, por el contrario, en una multiplicidad dispersa de reglas que, con frecuencia, tenia sus razones de ser en exigencias del todo extrañas a la naturaleza de los sonidos.

Podiamos hablar del nacimiento del autentico concepto de publico, por primera vez des de la antigua grecia se manifiesta, diafanamente una dualidad,un verdadrea fisura entre quien la escucha, por otra. A lo largo de toda le edad media, ejecutar y escuchar eran dos funciones que normalmente tendian a identificarse en la función aun mas amplia representada por la liturgia, la cual mezcla en una unica persona al interprete con el destino de la musica.